プライム編集の効率を改善する改変型pegRNA

プライム編集は、生細胞のDNAで、点変異、短い挿入、または短い欠失のほぼ全ての組み合わせの導入を可能にする。プライム編集ガイドRNA（pegRNA）は、プライムエディタータンパク質を標的座位に差し向けるとともに、目的の編集内容もコードしている。本研究では、逆転写酵素テンプレートとプライマー結合部位を含むpegRNAの3′領域の分解が、プライム編集システムの活性を害し、編集効率を低下させる場合があることを明らかにした。我々は、構造化されたRNAモチーフをpegRNAの3′末端に加えてその安定性を高め、3′側部分の分解を抑制した。得られた改変型pegRNA（epegRNA）は、オフターゲット編集活性を高めることなく、HeLa細胞、U2OS細胞、K562細胞、および初代ヒト繊維芽細胞でのプライム編集効率を3～4倍に改善した。我々は、3′構造モチーフの選択を最適化し、pegRNAと3′モチーフを結ぶ無干渉のヌクレオチドリンカーを発見する計算ツールpegLITを開発した。最後に、我々はepegRNAが疾病関連変異の導入や修正の効率を高めることを示した。