酵素を用いたアデノシンの脱アミノ化によるN⁶-メチルアデノシンのトランスクリプトーム規模のプロファイリングと定量

N⁶-メチルアデノシン（m⁶A）は、高等真核生物のメッセンジャーRNAに最も多く見られる内部修飾であり、細胞過程の調節で無数の役割を担っている。しかし、高分解能で定量的な検出方法が存在しないこともあり、m⁶Aの機能解析は進展していない。本論文では、アデノシンの包括的な脱アミノ化によってm⁶Aを検出・定量する酵素を用いた塩基配列解読技術であるeTAM-seq（evolved TadA-assisted N⁶-methyladenosine sequencing）を紹介する。我々は、HeLa細胞とマウス胚性幹細胞にeTAM-seqを用い、m⁶Aのトランスクリプトーム規模の分布を解析した。eTAM-seqで採用した酵素的脱アミノ化法はRNAを完全な状態に保ち、わずかな投入試料からのm⁶A検出を支える。m⁶Aのトランスクリプトーム規模のプロファイリングに加え、わずか10個の細胞（既存の定量的プロファイリング法よりも桁違いに少ない要求投入量）から、高カバー率の塩基配列解読によらない部位特異的なm⁶A定量を行うこともできた。eTAM-seqは、前例のない分解能でのm⁶A景観の探査のみならず、簡単な手順によるユーザー指定座位のm⁶A検出も可能にすると考えられる。