Research Abstract
CRISPR/Cas9のオールインワンベクター系を用いたヒト細胞における複数か所のゲノム編集
Multiplex genome engineering in human cells using all-in-one CRISPR/Cas9 vector system
2014年6月23日 Scientific Reports 4 : 5400 doi: 10.1038/srep05400
CRISPR/Cas9が仲介するゲノム編集は、遺伝子改変のための次世代戦略であり、1か所の遺伝子ターゲティングだけでなく、複数か所の標的に対する変異誘発も可能である。我々は、CRISPR/Cas9の多重性を最大限に利用するために、複数のガイドRNAを発現するカセットとCas9ヌクレアーゼ/ニッカーゼを発現するカセットを含む、オールインワン発現ベクターを構築するための系を確立した。さらに、この我々の新規な系により構築された、CRISPR/Cas9のオールインワンベクターを用いて、ヒト細胞において染色体欠失を含む複数か所を標的として編集することに成功した例を示す。我々の系は、複数か所のゲノム/エピゲノムの編集、複数の遺伝子の同時活性化/抑制、またそれ以上のことを行うための効率的な標的戦略である。
佐久間 哲史1, 西川 綾美1, 久米 悟士1, 茶山 一彰2 & 山本 卓1
- 広島大学大学院 理学研究科 数理分子生命理学専攻
- 広島大学大学院 医歯薬保健学研究院
CRISPR/Cas9-mediated genome editing is a next-generation strategy for genetic modifications, not only for single gene targeting, but also for multiple targeted mutagenesis. To make the most of the multiplexity of CRISPR/Cas9, we established a system for constructing all-in-one expression vectors containing multiple guide RNA expression cassettes and a Cas9 nuclease/nickase expression cassette. We further demonstrated successful examples of multiple targeting including chromosomal deletions in human cells using the all-in-one CRISPR/Cas9 vectors constructed with our novel system. Our system provides an efficient targeting strategy for multiplex genome/epigenome editing, simultaneous activation/repression of multiple genes, and beyond.
