Research Abstract
エレクトロポレーション法によるマウス受精卵への効率的なmRNA導入法と、CRISPR/Cas9システムとの組み合わせによる簡便なゲノム編集マウス作製法を確立
Electroporation enables the efficient mRNA delivery into the mouse zygotes and facilitates CRISPR/Cas9-based genome editing
2015年6月11日 Scientific Reports 5 : 11315 doi: 10.1038/srep11315
最近開発されたCRISPR/Cas9システムの使用により、遺伝子変異マウスの作製に必要な時間は大幅に短縮された。しかしながら、受精卵へのCRISPR/Cas9システム導入には、時間のかかるマイクロインジェクションを用いて行われているため、ハイスループットな遺伝学的解析（遺伝子変異マウス作製）を行うことは困難であった。今回我々は、簡便で高効率なゲノム編集マウス作製法を開発した。この方法では、CRISPR/Cas9システムのRNAを受精卵にマイクロインジェクションではなくエレクトロポレーションによって導入する。この方法は、遺伝子の破壊のみならず、一本鎖オリゴヌクレオチド（ssODN）を共導入することで、目的配列のノックインにも活用できた。この方法によりマウスにおける大規模な遺伝学的解析を行うことができると期待される。
Masakazu Hashimoto & Tatsuya Takemoto
Corresponding Authors
Recent use of the CRISPR/Cas9 system has dramatically reduced the time required to produce mutant mice, but the involvement of a time-consuming microinjection step still hampers its application for high-throughput genetic analysis. Here we developed a simple, highly efficient, and large-scale genome editing method, in which the RNAs for the CRISPR/Cas9 system are electroporated into zygotes rather than microinjected. We used this method to perform single-stranded oligodeoxynucleotide (ssODN)-mediated knock-in in mouse embryos. This method facilitates large-scale genetic analysis in the mouse.
